Western blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，它是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，然后分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

外泌体形成和释放后，会形成自身特有的标志性蛋白，利用WB对这些标志蛋白进行检测，通过WB来鉴定外泌体的标志蛋白是否存在于样品中。

外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63、CD81和CD9)）、热休克蛋白家族（(HSP60、HSP70、HSPA5、CCT2和HSP90)以及一些细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）、MHC-II(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素（不成熟的树突状细胞）。其中CD63、CD9、CD81以及TSG101、HSP70、ALIX等，是最常用到的细胞外囊泡标志物。

这些标志物蛋白其实主要是涉及到了囊泡的形成和分泌过程，他们产生于细胞中，定位于胞内的膜结构附近，如四跨膜蛋白（CD9，CD63和CD81），直接参与了细胞外囊泡内容物的分选；TSG101是ESCRT复合体相关的蛋白，而ESCRT复合体是膜形成和断裂的驱动器。ALIX直接涉及到了膜泡在形成过程中切割脱离质膜形成独立膜结构的过程。一般至少检测3个阳性蛋白（至少包括1个跨膜蛋白和1个细胞溶质蛋白）和1个阴性蛋白标志物。外泌体阳性蛋白标志物可选择跨膜蛋白CD9、CD63、CD81，以及溶质蛋白TSG101、Alix、HSP70。外泌体阴性蛋白标志物可选择内质网蛋白Calnexin、细胞核蛋白histone 3或高尔基体蛋白GM130。

收集细胞上清建议使用正常含有血清的培养基培养细胞，当细胞密度达到60%-70%时，更换无血清培养基，继续培养1-2天，细胞密度达到90%-95%时，即可收集细胞上清，用于提取外泌体。

为保证项目数据准确，请参考建议送样量；

尿液建议取晨尿。